žinios

„Javascript“ šiuo metu jūsų naršyklėje išjungtas.Kai kurios šios svetainės funkcijos neveiks, jei „JavaScript“ išjungta.
Užsiregistruokite, nurodydami konkrečią informaciją ir konkretų dominantį vaistą, ir mes suderinsime jūsų pateiktą informaciją su straipsniais mūsų didelėje duomenų bazėje ir nedelsdami atsiųsime jums PDF kopiją.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Sudžou universiteto pirmosios dukterinės ligoninės Infekcinių ligų skyrius, Sudžou miestas, Dziangsu provincija, 215000 Tel.virškinimo sistemos navikai, kurių bendras išgyvenamumas per 5 metus yra 14,1 proc.Daugelis pacientų, sergančių HCC, diagnozuojami pažengusioje stadijoje, todėl ankstyvas patikrinimas yra būtinas norint sumažinti mirtingumą nuo HCC.Be dažniausiai naudojamų aptikimo indikatorių, pvz., serumo alfa-fetoproteino (AFP), lęšio lektino reaktyvaus alfa-fetoproteino (AFP-L3) ir nenormalaus protrombino (vitamino K trūkumo sukelto baltymo II, PIVKA-II), skysčių biopsijos metodų. Įrodyta, kad jis turi diagnostinę vertę nustatant HCC.Lyginant su invazinėmis procedūromis, skysčių biopsija gali aptikti cirkuliuojančius piktybinius metabolitus.Skysčių biopsijos metodai aptinka cirkuliuojančias naviko ląsteles, cirkuliuojančią naviko DNR, cirkuliuojančią RNR ir egzosomas ir yra naudojami ankstyvam HCC tyrimui, diagnostikai ir prognoziniam įvertinimui.Šiame straipsnyje apžvelgiama molekulinė biologija ir įvairių skysčių biopsijos metodų taikymas, siekiant išskirti perspektyvius biomarkerius, kurie gali būti perspektyvūs ankstyvo HCC įvertinimo variantai, siekiant pagerinti ankstyvą didelės rizikos HCC grupių atranką.Raktažodžiai: skysčių biopsijos technika, kepenų ląstelių karcinoma, didelės rizikos grupė.
Hepatoceliulinė karcinoma (HCC) yra dažnas piktybinis virškinamojo trakto navikas, užimantis šeštą vietą tarp naujų piktybinių navikų atvejų tiek vyrams, tiek moterims.1 Pasaulyje kepenų vėžys yra trečia pagrindinė mirties nuo vėžio priežastis po plaučių ir gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio ir sudaro 8,3 % su vėžiu susijusių mirčių nuo visų piktybinių navikų.1 HCC prognozė yra glaudžiai susijusi su diagnozės stadija.Pagrindinės prasto išgyvenamumo priežastys sergant HCC yra intrahepatinės metastazės, vartų venų navikų trombai ir tolimos metastazės, neleidžiančios rezekcijai atlikti, o daugelis šių požymių pacientams jau yra diagnozės nustatymo metu.
Remiantis diagnostikos ir gydymo gairėmis, pagrindiniai HCC vystymosi rizikos veiksniai yra kepenų cirozė, lėtinė hepatito B viruso (HBV) arba hepatito C viruso (HCV) infekcija, alkoholinė suriebėjusių kepenų liga ir nealkoholinė suriebėjusių kepenų liga (NAFLD). ).2 Be to, HCC rizikos veiksniai yra aflatoksinais užteršto maisto vartojimas, šistosomozė, kitos cirozės priežastys, kepenų vėžio atvejų šeimoje, diabetas, nutukimas, rūkymas ir vaistų sukeltas kepenų pažeidimas.35 ir 45 metų didelės rizikos grupės turėtų reguliariai tikrintis sveikatą.Ankstyvas patikrinimas yra svarbi ankstyvo gydymo strategija, siekiant pagerinti bendrą pacientų, sergančių HCC, išgyvenamumą.
Ankstyvam HCC3,4 patikrinimui rekomenduojami tokie biomarkeriai kaip AFP, AFP-L3 ir PIVKA-II.Skystos biopsijos metodai parodė daug žadančių ankstyvos diagnostikos ir gydymo rezultatų.5,6 Didelė pažanga padaryta atliekant HCC skysčio biopsiją, kuri gali turėti didesnį jautrumą ir specifiškumą nei dažniausiai naudojami serumo žymenys, tokie kaip AFP (1 lentelė).
AFP yra plačiai naudojamas HCC biomarkeris ir šiuo metu yra pats išsamiausias biomarkeris, plačiai naudojamas ankstyvam ligos patikrinimui, diagnozei ir įvertinimui.Nuolat padidėjęs AFP lygis laikomas HCC progresavimo rizikos veiksniu.7,8 Mažos kepenų ląstelių karcinomos (sHCC) aptikimo dažnis didėja plėtojant ultragarsą ir kompiuterinę tomografiją, ir buvo nustatyta, kad AFP klinikinėje praktikoje yra ypač nejautrus hHCC aptikimui.Remiantis retrospektyviniu daugiacentriu tyrimu9, AFP teigiamas nustatytas 46 % (616/1338) HCC atvejų ir 23,4 % (150/641) sHCC atvejų.Be to, AFP kiekis yra padidėjęs pacientams, sergantiems lėtine kepenų liga ir ciroze.10 Taigi AFP turi ribotą sHCC atrankos poveikį.11 Remiantis Azijos ir Ramiojo vandenyno klinikinės praktikos gairėmis sergant kepenų ląstelių karcinoma, AFP vartoti nerekomenduojama.12 Klinikiniai įrodymai rodo, kad PIVKA-II yra pranašesnis už AFP gydant HCC ir kad PIVKA-II ir AFP derinys turi teigiamą poveikį. didesnė HCC diagnostinė vertė.13 Lyginant su audinių biopsija, skysčių biopsija pirmiausia aptinka su naviku susijusius metabolitus kūno skysčiuose (kraujyje, seilėse, pleuros skystyje, smegenų skystyje ar šlapime) ir yra mažiau invazinė į audinius.14 Be to, skystos biopsijos gali atspindėti piktybinius požymius, kurių nėra pirminiame naviko audinyje.15 Skystosios biopsijos klinikinėje praktikoje dar nėra tiriamos dėl visų tipų navikų, tačiau jų diagnostinis potencialas sergant vėžiu patraukia onkologų dėmesį.16 Skysčio biopsija gali aptikti cirkuliuojančias naviko ląsteles (CTC), cirkuliuojančią naviko DNR (cDNR), cirkuliuojančią laisvąją RNR (ecRNR) ir egzosomas.Šiame straipsnyje aptarsime įvairių skysčių biopsijos metodų ypatybes, vaidmenį ir taikymą ankstyvoje didelės rizikos HCC grupių atrankoje.
Ekstraląstelinė DNR (cfDNR) sveikų asmenų kraujo mėginiuose pirmą kartą buvo aprašyta 1948 m. Mandel ir kt.17 cfDNR yra maždaug 160–180 bp ilgio DNR fragmentas be ląstelių, daugiausia kilęs iš limfocitų ir mieloidinių ląstelių.ctDNR yra specifinis mutantinis DNR fragmentas, kurį naviko ląstelės išskiria į periferinį kraują, kuris atspindi naviko ląstelių genominę informaciją po tam tikrų patofiziologinių procesų, įskaitant nekrozę, apoptozę ir išskyrimą.CtDNR dalis bendroje cfDNR labai skiriasi priklausomai nuo naviko tipo, o pranešama, kad cDNR fragmentai paprastai yra mažesni nei 167 bp ilgio.18 Underhill tyrimas parodė, kad cfDNR fragmentai paprastai yra trumpesni už įprastą cfDNR.19 Palyginti su sveikais asmenimis, bendras cfDNR fragmentų ilgis vėžiu sergančių pacientų kraujyje yra trumpesnis, todėl cfDNR gali būti naudojama kaip ankstyvos naviko patikros rodiklis.Tam tikrų cfDNR fragmentų ilgių pogrupių praturtinimas gali pagerinti cDNR, susijusios su nemetastazavusiais kietaisiais navikais, aptikimą.Tyrimai parodė, kad ctDNR randama daugiau nei 75% pažengusių kasos, storosios žarnos, šlapimo pūslės, virškinimo trakto, kepenų, kiaušidžių, krūties, melanomos ir galvos bei kaklo vėžio atvejų.20,21 Tačiau ctDNR kiekis kraujyje priklauso nuo naviko vietos.22 Bettegoud atliktame tyrime nustatyta, kad pacientų, sergančių gaubtinės ir tiesiosios žarnos, krūties, kepenų, plaučių ir prostatos vėžiu, cDNR kiekis kraujyje yra didesnis nei kitų vėžio atvejų.Priešingai, pacientams, sergantiems burnos vėžiu, kasos vėžiu, skrandžio vėžiu ir glioma, cDNR koncentracija kraujyje buvo mažesnė.dvidešimt vienas
Kadangi ctDNR turi tokias pačias genetines mutacijas kaip ir pirminės naviko ląstelės, cDNR gali būti naudojama heterogeninėms naviko specifinėms mutacijoms ir epigenetiniams pokyčiams, įskaitant metilinimą, hidroksimetilinimą, vieno nukleotido variacijas ir kopijų skaičiaus variacijas, aptikti.dvidešimt trys
DNR metilinimas yra vienas iš labiausiai paplitusių epigenetinių pokyčių, sukeliančių genų represijas.Palyginti su normaliomis ląstelėmis, skiriasi bendras naviko ląstelių genomo metilinimo lygis, ypač auglio slopinančių genų metilinimas, kurį galima aptikti ankstyvoje stadijoje, o tai rodo, kad DNR metilinimo pokyčiai gali būti ankstyvos stadijos rodiklis. naviko atsiradimo nustatymas.Auglio slopinimo genai, susiję su HCC, gali būti inaktyvuoti promotorių metilinimo būdu, taip stimuliuojant naviko atsiradimą.24 DNR metilinimas yra idealus žymeklis ankstyvai navikų diagnostikai dėl savo audinių specifiškumo, aptinkamumo ir nepriklausomybės nuo amžiaus.Be to, DNR metilinimas yra dažnesnis, palyginti su somatinėmis mutacijomis, nes kiekviename tikslinio genomo regione yra daugiau tikslinių regionų ir kelios pakeistos CpG vietos.25 Be kelių CpG vietų, DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 ir RGS10.26 Xu ir kt. buvo nustatyta daug nepriklausomų hipermetilintų lokusų ctDNR.Palyginus 1098 HCC pacientų ir 835 sveikų kontrolinių asmenų cfDNR mėginius, nustatyta, kad su HCC susiję genai stipriai koreliuoja su atitinkamais plazmos cDNR metilinimo parašais.25 Remiantis laboratorine analize, buvo sukurtas nuspėjamasis modelis, kuriame yra 10 metilinimo žymenų, kurių jautrumas ir specifiškumas buvo atitinkamai 85,7% ir 94,3%, ir šie žymenys buvo labai koreliuojami su naviko mase, naviko stadija ir atsaku į gydymą.Šie rezultatai rodo, kad cDNR metilinimo žymenų naudojimas turi didelį pažadą diagnozuojant, stebint ir prognozuojant HCC.Metilinimo modelyje, kurį sudaro trys nenormaliai metilinti genai (APC, COX2, RASSF1A) ir vienas miRNR (miR203), kurį pateikė Lu ir kt.27, 27 modelio jautrumas ir specifiškumas diagnozuojant su HBV susijusį HCC buvo palyginami.80 proc.Be to, modelis gali aptikti 75% nediagnozuotų HCC pacientų, kurių AFP lygis yra 20 ng / ml.Su Ras susijusio domeno šeimos 1A baltymo (RASSF1A) genas yra pagrindinė pasikartojanti DNR seka žmogaus genome.Araujo ir kt.padarė išvadą, kad RASSF1A promotoriaus hipermetilinimas gali būti vertingas biomarkeris ankstyvam HCC patikrinimui ir galimas molekulinis epigenetinės terapijos taikinys.28 Vieno tyrimo metu RASSF1A promotoriaus hipermetilinimas serume buvo nustatytas 73,3 % pacientų, sergančių HCC.29 Ilgai įsiterpęs nukleotidų elementas 1 (LINE-1) yra dar vienas labai aktyvus retrotranspozicijos tarpininkas.LINE-1 hipometilinimas buvo nustatytas 66, 7% HCC serumo mėginių DNR ir buvo susijęs su ankstyvu pasikartojimu ir prastu išgyvenimu po radikalios rezekcijos.29 Hipermetilinimas yra įprastas genetinis procesas, kuris vaidina unikalų vaidmenį vystantis kepenų cirozei ir HCC.30 Priešingai, hidroksimetilinimas yra demetilinimo procesas, sukeliantis genų reaktyvaciją ir ekspresiją, o 5-hidroksimetilcitozino (5-hmC) produkto aptikimas šiame procese gali būti naudojamas navikui nustatyti.CDNR metilinimas ir hidroksimetilinimas yra susiję su naviko atsiradimu ir gali prisidėti prie ankstyvo HCC patikrinimo.Atliekant tyrimą, kuriame dalyvavo 2554 subjektai, cfDNR mėginiuose buvo rastas 31 genomo pločio 5-hmC, o lyginant 5-hmC sekas HCC pacientams ir didelės rizikos grupėms, pvz., sergantiems lėtinėmis ligomis, nustatyti 32 genai.Kepenų ligų diagnostikos modeliai.ir cirozė.Šis modelis buvo pranašesnis už AFP, atskirdamas HCC nuo naviko audinio.
Mutacijos koduojančiuose regionuose gali sukelti transkripcijos anomalijas, kurios gali sukelti baltymų sekų pokyčius ir galiausiai vėžį.Vieno nukleotido variantai yra svarbūs genominiai žymenys ankstyvam naviko atrankai dėl didelio audinių patikimumo ir didelio naviko bei audinių specifiškumo.Daugybė su HCC susijusių tyrimų, naudojant naujos kartos sekos nustatymą (NGS), skirtą vėžio egzomo ir viso genomo sekos nustatymui, nustatė bendrus mutavusius ląstelių genus, tokius kaip TP53 ir CTNNB1, taip pat keletą, įskaitant ARID1A, MLL, IRF2.Nauji genai, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 ir JAK1, rodo vidutinį mutacijų greitį. Mutantinių genų funkcijos analizė rodo, kad chromatino remodeliavimosi, Wnt/β-katenino ir JAK/STAT signalo perdavimo, P53 ląstelių ciklo kelio, epigenetinių modifikatorių, oksidacinio streso takų, PI3K/AKT/MTOR kelio ir RAS/RAF/ pokyčiai. MAPK kinazės kelias vaidina lemiamą vaidmenį HCC onkogenezėje.32,33 Tyrime, kurio metu buvo aptiktos su naviku susijusios mutacijos, Huang ir kiti nustatė, kad su naviku susijusių mutacijų, priklausančių nuo ctDNR, dažnis buvo 19,5 %, o specifiškumas – 90 %. .34 Be to, pacientams, kuriems buvo invazija į kraujagysles, buvo didesnė ctDNR mutacijų tikimybė (p=0,041) ir trumpesnis išgyvenimas be pasikartojimo (p<0,001). Mutantinių genų funkcijos analizė rodo, kad chromatino remodeliavimosi, Wnt/β-katenino ir JAK/STAT signalo perdavimo, P53 ląstelių ciklo kelio, epigenetinių modifikatorių, oksidacinio streso takų, PI3K/AKT/MTOR kelio ir RAS/RAF/ pokyčiai. MAPK kinazės kelias vaidina lemiamą vaidmenį HCC onkogenezėje.32,33 Tyrime, kurio metu buvo aptiktos su naviku susijusios mutacijos, Huang ir kiti nustatė, kad su naviku susijusių mutacijų, priklausančių nuo ctDNR, dažnis buvo 19,5 %, o specifiškumas – 90 %. .34 Be to, pacientams, kuriems buvo invazija į kraujagysles, buvo didesnė ctDNR mutacijų tikimybė (p=0,041) ir trumpesnis išgyvenimas be pasikartojimo (p<0,001).Mutantinių genų funkcijos analizė rodo, kad chromatino remodeliavimosi, Wnt/β-katenino ir JAK/STAT signalizacijos, P53 ląstelių ciklo kelio, epigenetinių modifikatorių, oksidacinio streso takų, PI3K/AKT/MTOR kelio ir RAS/RAF/MAPK kinazės kelio pokyčiai. lemiamas vaidmuo HCC naviko atsiradime.32,33 Tyrime, kuriame buvo nustatytos su naviku susijusios mutacijos, Huang ir kt.nustatė, kad nuo ctDNR priklausomų su naviku susijusių mutacijų dažnis buvo 19,5%, o specifiškumas - 90%.(.34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДДНК,0жжвыстна) .34 Be to, pacientams, kuriems buvo invazija į kraujagysles, buvo daugiau cDNR mutacijų (P=0,041) ir trumpesnis išgyvenamumas be ligos (P<0,001).Funkcinė mutantinių genų analizė atskleidė chromatino remodeliavimą, Wnt/β-katenino ir JAK/STAT signalizaciją, P53 ląstelių ciklo kelią, epigenetinius modifikatorius, oksidacinio streso kelią, PI3K/AKT/MTOR kelią ir RAS/RAF/MAPK. kinazės kelias vaidina lemiamą vaidmenį HCC onkogenezėje. 32,33 在 一 项 检测 到 相关 突变 突变 的 中 中 ， Huang 等 发现 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctDNA 的 的 为 为 为 更 ， 特异性 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 患者 患者 患者 患者 更 更 发生 发生 为 为 为 的 的 患者 患者 更 有 发生 发生 ctDNA突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）. 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 19.5% ， 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ctdna突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0,001）.32,33 Tyrime, kuriame buvo nustatytos su naviku susijusios mutacijos, Huang ir kt.nustatė, kad su naviku susijusios mutacijos 19,5 % priklauso nuo cDNR, o jų specifiškumas buvo 90 % 34. Be to, pacientams, kuriems buvo atlikta kraujagyslių invazija, buvo didesnė tikimybė, kad išsivystys cDNR.мутация (P = 0,041) ir более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutacija (P=0,041) ir trumpesnis išgyvenamumas be ligos (P<0,001).Kitas dažnas HCC vairuotojo genas yra TP53, kurio mutacijų dažnis viršija 30%.Tyrimai parodė, kad TP53 mutacijų dažnis ctDNR kraujyje ir šlapime svyruoja nuo 5% iki 60%.35 Johano tyrimas parodė, kad ctDNR mutacijų spektras vėlyvajame HCC turi panašų mutacijų dažnį kaip ankstyvojo HCC, įskaitant TERT promotorių (51 %), TP53 (32 %), CTNNB1 (17 %), PTEN (8 %), mutacijas AXIN1 ., ARID2, KMT2D ir TSC2 (po 6 proc.).36 β-katenino (CTNNB1) onkogenas vaidina svarbų vaidmenį Wnt signalizacijos kelyje.Transkripcijos koaktyvatorius CTNNB1 gali skatinti genų ekspresiją, kuri gali sukelti ląstelių proliferaciją, slopinti apoptozę ir angiogenezę.CTNNB1 taip pat gali sąveikauti su TERT, kad sukeltų hepatocitų transformaciją.33 Kai kuriuose kietuose navikuose TERT promotorius dažnai mutuoja.TERT, vieno iš ankstyviausių genetinių piktybinės HCC transformacijos pokyčių, pokyčiai gali sukelti telomerazės reaktyvaciją ciroze sergančių hepatocitų ir gali paskatinti proliferaciją bei užkirsti kelią senėjimui.Buvo pranešta, kad 33–37 TERT promotoriaus mutacijos atsiranda 59–90% pacientų, sergančių proliferaciniais kepenų mazgeliais ir ankstyva HCC, ir yra susijusios su išgyvenimu.38
Kopijų skaičiaus pokyčiai (CNA) yra svarbus somatinių mutacijų potipis.Tyrimai parodė, kad plačiai paplitusi ir židinio CNA našta yra genomo parašas, galintis numatyti naviko imuninę infiltraciją ir atskirtį kai kurių rūšių vėžiui.39 Aktyvus infiltracijos signalizavimas, didelis citolitinis aktyvumas, sunkus uždegimas ir genetiniai žymenys, susiję su antigeno pateikimu HCC.477 tiriamųjų vieno nukleotido polimorfizmų duomenų masyvo analizė atskleidė mažą naštą CNS.Priešingai, chromosomiškai nestabilūs navikai, turintys didelę didelę CNA apkrovą, parodė imuninio atmetimo požymius ir buvo susiję su proliferacija, DNR atstatymu ir TP53 disfunkcija.Xu ir kt.parodė, kad HCC grupė turėjo aukštesnius CNA balus nei lėtinių kepenų ligų grupė.40 Naudojant vienos ląstelės viso genomo sekos nustatymą, buvo nustatyta, kad CNA atsiranda anksti hepatokarcinogenezės metu ir išlieka santykinai stabilios auglio progresavimo metu.41 Chung ir kt.nustatė, kad cfDNR lygis buvo žymiai padidėjęs HCC sergantiems pacientams ir kad genomo CNA cfDNR buvo svarbus nepriklausomas prognostinis žymeklis HCC pacientams, gydytiems sorafenibu.42 Pacientams, kuriems buvo didesnė CNA našta, buvo didesnė ligos progresavimo ir mirties tikimybė nei tiems, kurių CNA našta buvo mažesnė.Ollerich ir kt.nustatė, kad kopijų skaičiaus nestabilumo indeksas (CNI) gali būti naudojamas vėžiu sergančių pacientų cfDNR CNA įvertinti.Jie pažymėjo, kad pacientams, sergantiems pažengusiu vėžiu, CNI balai buvo žymiai didesni nei kontrolinės grupės, kuri vertina paciento atsaką į sisteminę chemoterapiją ir imunoterapiją.43 Šie rezultatai rodo, kad skystuose biopsijos mėginiuose aptiktos CNA gali būti prognostiniai rodikliai pacientams, sergantiems pažengusiu vėžiu.HCC sisteminės terapijos fone.
Šiuo metu ctDNR aptikimo metodai gali būti skirstomi į tikslinius ir netikslinius.Trumpai tariant, tiksliniai metodai, tokie kaip skaitmeninė polimerazės grandininė reakcija (dPCR), BEAMing skaitmeninė PGR, amplifikacijos ugniai atspari mutacijų sistema-PCR, Capp-Seq ir Tam-Seq yra labai jautrūs iš anksto nustatytiems genams.Netiksliniai metodai, tokie kaip viso genomo sekos nustatymas ir NGS, suteikia išsamų viso genomo kraštovaizdžio vaizdą.44 Palyginti su tikslinėmis plokštėmis, viso genomo sekos nustatymas gali aptikti ne tik taškų mutacijas ir įterpimus, bet ir pertvarkymus bei kopijų skaičiaus variacijas.prognozė, o CTC ir cfDNA yra geri rodikliai, kurie gali būti naudojami dinaminiam HCC stebėjimui.45 Be to, cfDNR analizė gali būti naudingesnė nustatant HCC.Yan ir kt.parodė, kad cfDNR pacientų, sergančių HCC, plazmoje buvo žymiai didesnis nei pacientų, sergančių kepenų fibroze ir sveikų kontrolinių asmenų.Palyginti su AFP, tikimasi, kad ctDNA bus geresnis ankstyvojo HCC atrankos žymuo.46 Perspektyviniame tyrime su 47 skystomis biopsijomis, kurių metu buvo tiriamas cfDNR ir baltymas populiacijos populiacijoje, buvo įrodyta, kad jos buvo veiksmingos atskiriant pacientus, sergančius HCC, nuo pacientų, neturinčių HCC.Stebint 331 ultragarsu normalų ir AFP neigiamą pacientą, cfDNR jautrumas ir specifiškumas diagnozuojant HCC buvo atitinkamai 100% ir 94%, todėl cDNR galėjo aptikti HCC besimptomiams HBsAg seropozityviems asmenims.Yeo48 tyrime pacientams, sergantiems HCC, nustatytas didelis RASSF1A promotoriaus hipermetilinimo dažnis (92,5 %).Be to, Xu ir kt.sukūrė diagnostinį modelį, skirtą prognozuoti HCC, naudodamas specifinių metilinimo žymenų grupę, kurios specifiškumas ir jautrumas yra atitinkamai 90, 5% ir 83, 3%.Ši grupė leidžia atskirti pacientus, sergančius HCC, nuo pacientų, sergančių kitomis kepenų ligomis, o tai yra geriau nei AFP.Jie taip pat nustatė, kad normalios kontrolinės grupės, kurių testas buvo teigiamas, gali turėti HCC rizikos veiksnių, pvz., HBV infekciją arba alkoholio vartojimo istoriją.25 Manome, kad didelės HCC rizikos veiksniai gali skatinti cfDNR hipermetilinimą, kuris vėliau prisideda prie HCC progresavimo, todėl cfDNR gali atlikti pagrindinį vaidmenį tikrinant didelės rizikos grupes.Cai ir kt.apibendrina visą ctDNR mutacijų spektrą ir siūlo patikimą strategiją, kaip įvertinti naviko naštą pacientams.49 Ši strategija gali nustatyti naviko atsiradimą vidutiniškai 4, 6 mėnesio iki vaizdo pasikeitimo ir parodė geresnį diagnostinį efektyvumą, palyginti su serumo biomarkeriais AFP, AFP-L3 ir PIVKA-II.Diagnostinė cDNR tyrimo vertė buvo įrodyta, kai vaizdo įvertinimo nėra, todėl cDNR tyrimas yra naudingas diagnozuojant ankstyvą HCC didelės rizikos grupėse.Neseniai mokslininkai naudojo NGS technologiją, kad analizuotų daugiamatės genetinės variacijos rodiklius (įskaitant 5-hidroksimetilcitoziną, 5'-motyvą, fragmentaciją, nukleosomų pėdsakus, HIFI) 3204 klinikiniuose mėginiuose ir cfDNR.50 pakartotinai patvirtintų HIFI modelių su trimis nepriklausomais traukinių, bandymų ir bandymų rinkiniais parodė stabilų ir patikimą HCC ir ne HCC populiacijų skirtumą su atitinkamai 95,79% ir 95,42% jautrumu HCC specifiniuose testuose ir bandymų rinkiniuose.Lytys buvo atitinkamai 95,00% ir 97,83%.HIFI metodo diagnostinė vertė yra didesnė nei AFP, skiriant HCC nuo cirozės.Be to, ctDNR taip pat naudojama chirurginiam gydymui.Atsushi ir kt.nustatė priešoperacinį ctDNR kiekį serume pacientams, sergantiems HCC, ir nustatė, kad pasikartojimo dažnis ir ekstrahepatinių metastazių dažnis cDNR teigiamų grupių grupėje buvo žymiai didesnis nei cDNR neigiamų grupių, o cDNR lygiai buvo reikšmingai koreliuojami.su naviko progresavimu.51 Būdamas labai jautrus biomarkeris, ctDNR gali numatyti HCC gebėjimą įsiveržti į kraujagysles.Wang ir kt.atlikta viso genomo sekvencija 46 pacientams, sergantiems HCC, o daugiamatė analizė parodė, kad cDNR varianto alelio dažnio ribinė vertė invazijai į mikrokraujagysles yra 0,83%, jautrumas 89,7%, specifiškumas 80,0%.nepriklausomas mikrovaskulinės invazijos rezekuojamame HCC rizikos veiksnys, o tai rodo, kad cDNR gali padėti nustatyti optimalų gydymą.Apibendrinant galima pasakyti, kad ctDNA yra visiškai susijusi su HCC atsiradimu ir vystymusi ir gali būti naudojama ankstyvam patikrinimui, chirurginiam įvertinimui ir ligos stebėjimui.
CTC yra piktybinės ląstelės, gautos iš pirminių navikų arba metastazių, kurios metastazuoja į kraują.Auglio ląstelės išskiria matricos metaloproteinazes (MMP), kurios suardo bazinę membraną, todėl naviko ląstelės gali tiesiogiai patekti į kraują ir limfos kraujagysles.Tačiau daugumą CTC greitai pašalina anoikis, imuninė ataka ar šlyties stresas.53 Epitelio-mezenchiminio perėjimo (EMT) dėka CTC galima lengvai išskirti iš pirminio naviko audinio, įsiskverbti į kapiliarus ir žymiai pagerinti išgyvenamumą, metastazes, invaziškumą ir atsparumą vaistams.Tyrimai parodė, kad pirminiuose metastazavusiuose navikuose yra didelis įvairių naviko ląstelių heterogeniškumas.Taigi, CTC analizė gali padėti visapusiškai suprasti naviko ląstelių heterogeniškumą.54
Specifiniai su HCC susijusių CTC žymenys yra glipikanas-3 (GPC3), asialoglikoproteino receptorius (ASGPR), epitelio ląstelių adhezijos molekulė (EpCAM) ir su kamieninėmis ląstelėmis susiję žymenys, tokie kaip CD44, CD90, 55 ir tarpląstelinės adhezijos molekulė 1 (ICAM11).) .56 GPC3 žymuo yra ląstelės membranoje pritvirtintas baltymas, kliniškai naudojamas patologinei HCC analizei ir apibūdinimui.57 GPC3 ekspresija dažniau pasireiškia HCC naviko ląstelėse su vidutine ir maža diferenciacija ir skatina ekstrahepatinę migraciją;be to, GPC3+ CTC buvimas rodo metastazavusį HCC.58 ASGPR yra transmembraninis baltymas, ekspresuojamas tik hepatocitų paviršiuje ir yra labai išreikštas gerai diferencijuotoje HCC.EpCAM yra vienas iš dažniausiai naudojamų su membrana susijusių baltymų CTC užfiksuoti.EpCAM buvo nustatytas kaip HCC ląstelių, turinčių kamieninių ląstelių charakteristikas, paviršiaus žymeklis59, kuris koreliuoja su įvairiomis klinikopatologinėmis HCC ypatybėmis, tokiomis kaip kraujagyslių invazija, įvertintas AFP lygis ir pažengusi kepenų vėžio stadija Barselonos ligoninėje (BCLC).60 CTC EMT fenotipas yra labai metastazavęs.54 EMT procesai CTC skatina HCC metastazes.EMT žymenų, tokių kaip vimentinas, sukimas, E-box cinko piršto surišimas (ZEB) 1, ZEB2, sraigė, šliužas ir E-kadherinas, ekspresija buvo tiriama naudojant kepenų kilmės CTC iš HCC pacientų.58 Chengo sukurta CanPatrol™ sistema [61] suskirstė CTC į tris fenotipinius pogrupius pagal daugiausia išreikštus žymenis: epitelio fenotipą (EpCAM, CK8/18/19), mezenchiminį fenotipą (vimentinas, susuktas) ir mišrius fenotipus.176 pacientams bendras CTC buvo pranašesnis už AFP, atskirdamas HCC nuo gerybinės kepenų ligos.Bendro CTC, AFP ir bendrojo CTC ir AFP AUC vertės buvo 0,774 (95 % PI, 0,704–0,834), 0,669 (95 % PI, 0,587–0,750) ir 0,821 (95 % PI, 0,7866–0,7866–0). ).), atitinkamai.CTC klasifikacija, pagrįsta EMT, gali numatyti HCC diagnozę, ankstyvą pasikartojimą, metastazes ir trumpesnį bendrą laiką.
Šiuo metu CSC aptikimo metodai apima fizinius ir biologinius metodus.Fizikiniai metodai, dažnai vadinami sodrinimu, pagrįstu biofizinėmis savybėmis, daugiausia priklauso nuo fizinių CSC savybių, tokių kaip dydis, tankis, krūvis, mobilumas ir deformuojamumas.Priklausomai nuo fizinių savybių, yra įvairių metodų, tokių kaip filtravimu pagrįstos sistemos, dielektroforezė ir kt. Pastaroji, dar žinoma kaip imunoafinitetu pagrįstas sodrinimas, daugiausia pagrįstas antigeno ir antikūnų surišimu, nes taikant metodą naudojami antikūnai prieš navikui specifinius biomarkerius. tokie kaip EpCAM, ASGPR, žmogaus epidermio augimo faktoriaus receptorius 2 (HER2), prostatos specifinis antigenas (PSA), žmogaus pancitokeratinas (P-CK) ir karbamoilfosfato sintazė 1 (CPS1).62 Kitas tipas, vadinamas be sodrinimo metodu, naudoja srauto citometriją, kad atskirtų CTC nuo leukocitų pagal didesnį branduolio ir citoplazmos santykį ir dydį.Šiuo metu vienintelis FDA patvirtintas testas CTC aptikti yra Cell-Search™ sistema, kuri naudoja EpCAM ląstelių paviršiaus žymeklį. Tačiau kombinuotas žymenimis pagrįstas CTC aptikimas gali padidinti teigiamumo koeficientą.54 Antikūnų prieš ASGPR ir CPS1 mišinys pasiekė 91 % CTC aptikimo dažnį pacientams, sergantiems HCC.63 Zhang ir kt. naudojo CTC-Chip su antikūnais prieš ASGPR, P. -CK ir CPS1, ir 100 procentų skyrė HCC pacientus nuo sergančių gerybine kepenų liga arba ne HCC vėžiu.64 Wang atliktas tyrimas aptiko EpCAM+ CTC 60 % 42 HCC pacientų ir nustatė reikšmingą ryšį tarp abiejų teigiamų rezultatų. dažnis ir CTC su TNM stadija skaičius.65 Guo ir kt. nustatė, kad CTC gautas PGR balas buvo padidėjęs 125 iš 171 (73 %) pacientų, kurių AFP lygis buvo <20 ng/ml, o jautrumas 72,5 % ir specifiškumas yra 95,0 %, palyginti su 57,0 % ir 90,0 % AFP esant 20 ng/mL ribai.66 AFP ir CTC derinys gali pagerinti HCC aptikimą.45 Manoma, kad ankstyvoje grupių patikroje CTC turi pranašumą prieš AFP. didelė rizika susirgti HCC. Tačiau kombinuotas žymenimis pagrįstas CTC aptikimas gali padidinti teigiamumo koeficientą.54 Antikūnų prieš ASGPR ir CPS1 mišinys pasiekė 91 % CTC aptikimo dažnį pacientams, sergantiems HCC.63 Zhang ir kt. naudojo CTC-Chip su antikūnais prieš ASGPR, P. -CK ir CPS1, ir 100 procentų skyrė HCC pacientus nuo sergančių gerybine kepenų liga arba ne HCC vėžiu.64 Wang atliktas tyrimas aptiko EpCAM+ CTC 60 % 42 HCC pacientų ir nustatė reikšmingą ryšį tarp abiejų teigiamų rezultatų. dažnis ir CTC su TNM stadija skaičius.65 Guo ir kt. nustatė, kad CTC gautas PGR balas buvo padidėjęs 125 iš 171 (73 %) pacientų, kurių AFP lygis buvo <20 ng/ml, o jautrumas 72,5 % ir specifiškumas yra 95,0 %, palyginti su 57,0 % ir 90,0 % AFP esant 20 ng/mL ribai.66 AFP ir CTC derinys gali pagerinti HCC aptikimą.45 Manoma, kad ankstyvoje grupių patikroje CTC turi pranašumą prieš AFP. didelė rizika susirgti HCC.Tačiau žymenimis pagrįstas kombinuotas CTC aptikimas gali padidinti teigiamų rezultatų procentą.54 Anti-ASGPR ir CPS1 antikūnų mišinys pasiekė 91 % CTC aptikimo dažnį pacientams, sergantiems HCC.63 Zhang ir kt.naudojo CTC-Chip su antikūnais prieš ASGPR, P-CK ir CPS1, taip pat 100% atskyrė pacientus, sergančius HCC nuo gerybine kepenų liga arba ne HCC.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. CTC su TNM stadija dažnis ir skaičius.65 Guo ir kiti nustatė, kad iš CTC gautas PGR buvo padidėjęs 125 iš 171 (73 %) pacientų, kurių AFP lygis buvo <20 ng/ml, jautrumas 72,5 %, o specifiškumas 95,0 %, palyginti su 57,0 % ir 90,0 % AFP, kai ribinis lygis yra 20 ng/mL.66 AFP ir CTC derinys gali pagerinti HCC aptikimą.45 Manoma, kad CTC turi pranašumą prieš AFP atliekant ankstyvą patikrą. grupės.su didele HCC rizika.Tačiau žymenimis pagrįstas kombinuotas CTC aptikimas gali padidinti teigiamų rezultatų procentą.54 Anti-ASGPR ir CPS1 antikūnų mišinys pasiekė 91% CTC aptikimo dažnį pacientams, sergantiems HCC.63 Zhang ir kt.naudojo CTC lustus su antikūnais prieš ASGPR, P-CK ir CPS1 ir išskyrė pacientus, sergančius HCC nuo gerybinės kepenų ligos ir ne HCC, 100 proc.64 Wang tyrimas nustatė 60 % EpCAM+ CTC 42 HCC pacientams ir nustatė reikšmingą ryšį tarp dažnio ir CTC skaičiaus TNM stadijoje. 65 Guo 等人发现，在AFP 水平<20 ng/mL 的125/171 (73%) 名患者中，CTC 衍生的PCR 评分升高，敏感性为72.5%，特异性为95.0%，而AFP 在截止值为20 ng/mL 时的特异性为57.0% 和90.0%. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， ctc 衍生 pcr 评分 ， 敏感性 为 为 72.5%， 为 95.0%， AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 20 ng/ml 时 的 特异性 为 为 57,0% 和 90,0%。。65 Guo ir kt.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. nustatė, kad 125 iš 171 (73 %) pacientų, kurių AFP lygis < 20 ng/ml, CTC gautos PGR vertės buvo padidintos 72,5 % jautrumu ir 95,0 % specifiškumu, o AFP specifiškumas buvo ribinis. buvo 20 ng/ml.ml buvo 57,0 % ir 90,0 %.66 ORP ir CTC derinys pagerina HCC aptikimą.Manoma, kad 45 CTC yra pranašesni už AFP ankstyvoje didelės rizikos HCC populiacijų atrankoje.Taigi CTC teigiamoms ir didelės rizikos HCC grupėms CTC tyrimai turėtų būti reguliariai derinami su ultragarsu ir AFP aptikimu.Tačiau CTC laikomi svarbiais naviko metastazių ir pasikartojimo prognozėmis, o CTC aptikimas nerekomenduojamas atskirai kaip diagnostikos priemonė.Todėl CTC gali būti geresnis nuspėjamasis biomarkeris nei kiti šiuo metu naudojami žymenys. Zhou ir kt. nustatė, kad pacientams, kuriems buvo padidėjęs EpCAM+ CTC ir reguliuojamųjų T ląstelių skaičius, buvo didesnė HCC pasikartojimo rizika nei tiems, kuriems buvo mažas CTC skaičius, o pasikartojimo santykis buvo 66,7 % ir 10,3 % (P < 0,001).67 Panašų tyrimą pranešė Zhong ir kt.68 Be to, Qi nustatė, kad 101 iš 112 pacientų (90,81 %), sergančių HCC, įskaitant tuos, kurie serga ankstyvos stadijos liga, buvo teigiami CTC ir kad labai maži HCC mazgeliai buvo aptikti po 3 iki 5 mėnesių stebėjimo. Zhou ir kt. nustatė, kad pacientams, kuriems buvo padidėjęs EpCAM+ CTC ir reguliuojamųjų T ląstelių skaičius, buvo didesnė HCC pasikartojimo rizika nei tiems, kuriems buvo mažas CTC skaičius, o pasikartojimo santykis buvo 66,7 % ir 10,3 % (P < 0,001).67 A panašų tyrimą pranešė Zhong ir kt.68 Be to, Qi nustatė, kad 101 iš 112 pacientų (90,81 %), sergančių HCC, įskaitant tuos, kurie serga ankstyvos stadijos liga, buvo teigiami CTC ir kad labai maži HCC mazgeliai buvo aptikti po 3 iki 5 mėnesių stebėjimas. Чжоу ir др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou ir kt. nustatė, kad pacientams, kuriems yra padidėjęs EpCAM+ CTC ir reguliuojančių T ląstelių, HCC pasikartojimo rizika buvo didesnė nei tiems, kurių CTC buvo mažas – pasikartojimo dažnis buvo 66,7 %, palyginti su 10,3 % (P<0,001)67.Panašų tyrimą atliko Zhong ir kt.68. Be to, Qi nustatė, kad 101 iš 112 pacientų (90,81 %), sergančių HCC, įskaitant tuos, kurie serga ankstyva liga, turėjo CTC ir kad po 3–5 mėnesių stebėjimo buvo aptikti labai maži HCC mazgeliai. Zhou 等 人 ， 与 与 ctc 数量 少 少 的 患者 相比 相比 ， Epcam+ ctc 和 调节性 调节性 数量 升高 升高 的 患者 发生 HCC 复发 风险 更 高 ， 复发率 复发率 为 为 为 为 为 为 为 为 和 和 和 和 和 10,3% (p <0,001)。。 ， 复发率 复发率 为 为 为 为 和 和 和 10,3% (p <0,001)。。 ， 复发率 复发率 为 为 为 和 和 和 10,3% (p <0,001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0,001)……………………………… Чжоу ir др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou ir kt.nustatė, kad pacientams, kuriems yra padidėjęs EpCAM+ CTC ir reguliuojančių T ląstelių kiekis, buvo didesnė HCC pasikartojimo rizika, palyginti su pacientais, kuriems buvo mažiau CTC, o pasikartojimo dažnis buvo atitinkamai 66,7% ir 10,3% (P < 0,001).Apie panašų tyrimą pranešė Zhong ir kt.68 Be to, Qi nustatė, kad 101 iš 112 HCC pacientų (90,81 %), įskaitant pacientus, sergančius ankstyva liga, turėjo teigiamus CTC rezultatus ir po 3 apsilankymų nustatė labai mažus HCC mazgus.Stebėjimas iki 5 mėnesių.Jie taip pat nustatė CTC 12 pacientų, sergančių lėtine HBV infekcija, ir per 5 mėnesius nustatė mažus HCC navikus 2 CTC teigiamiems pacientams.69 Taigi, CTC gali būti naudojami prognozuojant HCC, 70 tačiau jie gali būti naudojami dažniau kaip nuspėjamieji biomarkeriai.
Kaip ir cfDNR, cfRNR patenka į kraują per įvairias sistemas.Šios periferinio kraujo molekulės yra vėžinis audinys, kurio kilmės vieta.Palyginti su žymenimis, aptiktais neinvaziniais metodais, cfRNR yra dinamiškiau reguliuojamos, būdingos audiniams ir gausu tarpląstelinėje aplinkoje.Daugelyje tyrimų buvo pranešta apie 71 miRNR (miRNR) reikšmę ir diagnostinę vertę HCC.miRNR yra endogeninės nekoduojančios RNR (ncRNR), kurios reguliuoja įvairią molekulinę biologinę veiklą, slopindamos tikslinių pasiuntinių RNR (mRNR) transliaciją.miRNR yra apoptoziniuose kūnuose, įdėtuose į egzosomas, tačiau jie taip pat gali stabiliai prisijungti prie serumo baltymų ir lipidų periferiniame kraujyje ir gali būti naudojami HCC įvertinti.MikroRNR dalyvauja kepenų regeneracijoje, lipidų metabolizme, apoptozėje, uždegime ir HCC vystymesi.72 Onkogeninės miRNR, tokios kaip miR-21, miR-155 ir miR-221, yra gerai žinomos HCC.Visų pirma, miR-21 vaidina pagrindinį vaidmenį kolageno sintezėje ekstraląstelinėje matricoje ir fibrozėje ir skatina hepatokarcinogenezę, aktyvindamas kraujodaros kamienines ląsteles.72,73 naviko slopinimo miRNR HCC apima miRNA-122, miRNA-29, Let-7 šeimą ir miRNA-15 šeimą.Let-7 šeimą sudaro daugybė naviko slopintuvų miRNR, nukreiptų į RAS šeimą.„MiR-15“ šeima apima miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 ir miR-497, kurios turi komplementarias sekas tam tikroms mRNR.Be to, ilgos nekoduojančios RNR (lncRNR) ir žiedinės RNR (cirRNR) taip pat svarbios ankstyvam HCC patikrinimui.lncRNR yra plačiausia ncRNR klasė, įskaitant į mRNR panašias ncRNR, ir dalyvauja daugelio žmonių ligų patogenezėje.LncRNR vaidina reguliuojantį vaidmenį kepenų mikroaplinkoje ir lėtinėse kepenų ligose.74 CircRNA taip pat yra ncRNR klasė, turinti daugybę funkcijų reguliuojant genų ekspresiją.Pastaruoju metu cirRNR buvo laikomos HCC diagnostikos priemonėmis.
Cirkuliuojanti laisva RNR pasižymi nepaprastu stabilumu, įskaitant atsparumą temperatūrai, pH ir RNazei, todėl fnRNR išskyrimas iš periferinio kraujo nėra toks varginantis naudojant standartinius RNR gryninimo metodus.Dažniausiai naudojami metodai yra NGS, microarray ir RT-qPCR.NGS leidžia išmatuoti mikroRNR visame genome.Tačiau šis metodas yra brangus, o analizė nėra standartizuota.Priešingai, RT-qPCR yra nebrangus, greitai amplifikuoja nukleino rūgštis ir siūlo daug privalumų, tokių kaip didesnis jautrumas, didesnis tikslumas, platesnis dinaminis diapazonas ir reikia mažiau mėginių.Mikrogardelės yra dar vienas miRNR aptikimo metodas, pagrįstas jautria ir specifine tikslinių miRNR hibridizacija su papildomais DNR zondais 75 , tačiau mikrogardelių duomenų analizė užima daug laiko.
Pranešta, kad cirkuliuojantys miR-122 ir Let-7 gali būti naudingi diagnozuojant ankstyvos stadijos HCC didelės rizikos grupėse, žymenis pacientams, kuriems yra su HBV susijusių ikivėžinių mazgų ir ankstyvos stadijos HCC.76 Cai ir kt.nustatė, kad Let-7 šeimos nariams (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 ir miR-199a/b) gresia lėtinė liga. HCC pacientams, sergantiems hepatitu.Let-7 šeima gali būti veiksmingas pakaitinis biomarkeris prognozuojant HCC išsivystymą didelės rizikos grupėse, susijusiose su lėtiniu hepatitu C. 77 miR-122 pasižymi dideliu diagnostikos tikslumu nustatant ankstyvą HCC pacientams, sergantiems kepenų ciroze.78 Serumas cirkuliuojantis MiR-107 taip pat buvo įvertintas ankstyvosiose HCC stadijose 79 ir parodė gerą potencialą didelės rizikos populiacijose.Zhou ir kt. pranešė, kad miRNR grupė (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a ir miR-801) gali atskirti HCC nuo lėtinio hepatito B (CHB) ir cirozės. jautrumas buvo atitinkamai 79,1% ir 75%, o specifiškumas 76,4% ir 91,1%.80 Su HBV susijusiame HCC nustatėme, kad miR150 lygis buvo žymiai sumažintas, palyginti su lėtiniu HBV sergančiais pacientais, neturinčiais HCC (jautrumas 79,1%, specifiškumas 76,5%).-224 HCC buvo padidėjęs, palyginti su sveikais kontroliniais žmonėmis, o pogrupių analizė parodė didesnį kiekį pacientams, sergantiems HCC, susijusiu su HBV.Su hepatitu B susijusia ciroze ir HCC pacientai nustatė siRNR klasifikatorių, turintį septynias skirtingai išreikštas siRNR, galinčias aptikti HCC skirtingose ​​​​kontrolėse;AUC diapazonas ankstyvojo patikrinimo metu yra geresnis nei AFP savanorių.Jie nustatė, kad keturios miRNR (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p ir miR-365a-3p) gali atskirti pacientus, sergančius HCC, nuo pacientų, neturinčių HCC.Penkios per daug ekspresuojančios miRNR (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p ir miR-148a-3p) laikomos potencialiomis HBV infekcijomis sergant HCC, ciroze ir CHB biomarkeriais, ypač miR-34a-5p gali būti kepenų cirozės biomarkeriai85 ir gali būti potencialūs biomarkeriai ankstyvam HCC tyrimui didelės rizikos populiacijose.Labiausiai ištirta HCC lncRNR yra labai aktyvuota sergant kepenų vėžiu (HULC).Kiti tyrimai parodė, kad HULC, cirkuliuojantis HCC pacientams, gali būti naudojamas kaip diagnostinis žymeklis, nes ši lncRNR yra labai reguliuojama HCC pacientams, palyginti su sveikais asmenimis.71,86 Be kitų lnRNR, LINC00152 yra laikoma geriausia diagnostine lncRNR dėl savo didelio AUC, jautrumo ir specifiškumo.86 Viename tyrime LINC00152 periferinio kraujo ekspresija palaipsniui didėjo nuo normalios sveikos kontrolinės grupės iki pacientų, sergančių CHB ir ciroze, ir galiausiai buvo didžiausia sergant HCC.CircSMARCA5 ekspresijos HCC sergančių pacientų plazmoje tyrimai parodė laipsnišką HCC ekspresijos mažėjimą nuo hepatito iki cirozės ir ikivėžinių pakitimų.87 ROC kreivių analizė patvirtino šių cirRNR potencialą atskirti pacientus, sergančius hepatitu ar kepenų ciroze, nuo sergančiųjų HCC, ypač tų, kurių AFP lygis yra mažesnis nei 200 ng/ml.Be to, Zhu išanalizavo 13 617 ciklinių RNR su HBV susijusių HCC pacientų plazmos mėginiuose ir patvirtino, kad 6 ciklinės RNR buvo skirtingai išreikštos sergant HCC ir HBV susijusia ciroze, o tai rodo, kad cRNR gali būti naudingos.žymenys, skirti ankstyvam didelės rizikos grupių, pavyzdžiui, susijusių su kepenų ligomis, skleroze, atrankai.88
Egzosomos yra 40–160 nm skersmens membraninės pūslelės;kelios tarpląstelinės pūslelės susilieja su ląstelės membrana ir patenka į tarpląstelinę matricą.Juose yra daug aktyvių komponentų, įskaitant lipidus, baltymus, RNR ir DNR, ir jie atlieka pagrindinį ryšį tarp ląstelių, tiek HCC, tiek ne HCC ląstelių.89,90 egzosomos reguliuoja HCC progresavimą aktyvindamos hepatocitų fibroblastus ir žvaigždžių ląsteles, imunines ląsteles, normalius hepatocitus ir HCC ląsteles.91 Naviko mikroaplinkoje naviko ląstelės gamina daugybę egzosomų, kurios iš vėžinių ląstelių pernešamos į nesubrendusias ląsteles, kurios savo ruožtu dalyvauja onkogenezėje, skaidyme ir ląstelių signalizacijoje.92 Tyrimai parodė, kad egzosomos gali perkelti onkogenus į normalias ląsteles patologinių procesų metu, o tai gali būti vienas iš naviko invazijos ir metastazių mechanizmų.93 Egzosomų vaidmuo vėžio progresavime gali būti dinamiškas ir būdingas vėžiui tarpininkauja ląstelių signalizacijai ir metabolizmui.94 Egzosomų krovinių molekulių charakteristikos ir dinaminiai pokyčiai tiesiogiai atspindi tėvų naviko ląstelių ypatybes ir dinaminius pokyčius95, o tai yra ir egzosomų panaudojimo vėžio diagnostikoje ir prognozėje, taip pat individualaus atsako į priešvėžinį gydymą prognozavimo pagrindas. ..96
Tradiciniai laboratoriniai egzosomų išskyrimo ir analizės metodai yra sudėtingi, daugiapakopiai ir reikalaujantys daug laiko, įskaitant ultracentrifugavimą, filtravimą, dydžio išskyrimo chromatografiją, imunoafinitetinį valymą, Western blotting, su fermentais susietą imunosorbentinį tyrimą (ELISA), PGR ir srauto analizę.Miniatiūrinės sistemos ir „lab-on-a-chip“ platformos, kuriose naudojamos mikro/nanotechnologijos, yra plačiai kuriamos, kad būtų galima greitai ir patogiai atskirti egzosomas.Nanodalelių sekimo analizė (NTA) yra plačiai naudojamas metodas egzosomų dydžiui ir koncentracijai apibūdinti, įskaitant tokius metodus kaip magnetinės nanodalelės ir polihidroksialkanoatai.Mikrofluidiniai ir elektrocheminiai metodai taip pat gali greitai aptikti didelio derlingumo egzosomas.
Egzosominiai baltymai yra svarbūs žymenys diagnozuojant HCC.Arbelaiz tyrime 98 RasGAP SH3 surišančio baltymo (G3BP) ir polimerinio imunoglobulino receptoriaus (PIGR) lygis buvo žymiai padidėjęs HCC gautose egzosomose, o tariamas bendras šių dviejų baltymų veiksmingumas buvo pranašesnis už AFP.Geležies perteklius yra svarbus veiksnys, prisidedantis prie HCC vystymosi.Tseng pranešė, kad hepcidinas gali atlikti pagrindinį vaidmenį atsparumui HCC.99 Egzosomos, gautos iš HCC pacientų serumų, turėjo žymiai didesnį hepcidino mRNR variantų kopijų skaičių nei sveiki jų kolegos, o tai rodo, kad hepcidinas gali būti naujas diagnostinis HCC biomarkeris.14-3-3ζ baltymas egzosomose, kurį gamina 100 HCC, gali sumažinti T ląstelių aktyvaciją, proliferaciją ir diferenciaciją bei gali sukelti T ląstelių transformaciją į reguliuojančias T ląsteles, dėl to T ląstelių išeikvojimas.Tai patvirtina keli tyrimai, tiriantys naviko vengimą nuo imuninės priežiūros, 102 kurie gali prisidėti prie HCC naviko atsiradimo.
Be ecRNR buvimo plazmoje ar serume, RNR praturtintos egzosomos gali būti naudojamos neinvaziniam realiuoju laiku nustatymui ankstyvoje naviko atrankoje ir naviko evoliucijai bei atsakui į gydymą nustatyti.Egzosominės miRNR-21 kiekis kraujo serume HCC grupėje buvo 2,21 karto didesnis nei CHB grupėje, o HCC grupėje – 5,57 karto didesnis nei sveikų žmonių.Wang tyrime egzosomos žymiai padidino HCC, palyginti su ciroze sergančiais pacientais, kurių AUC vertės buvo 0,83 (95% PI 0,74–0,93) ir 0,94 (95% PI 0,88–1,00).104 Gauti duomenys išaiškino specifinių egzosominių krovinių molekulių dalyvavimą onkogenezės ir HCC progresavimo reguliavime.105 MiR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 ir miR-26a ekspresija serume yra nuosekli.ir metastazių, o miR21 lygis buvo daug didesnis HCC pacientų nei sveikų kontrolinių asmenų, taip pat CHB pacientų.102 LncRNR turėjo potencialią diagnostinę reikšmę sergant HCC.Tyrimai parodė, kad egzosomos, gautos iš HCC pacientų serumo, turi žymiai didesnį LINC00161, LINC000635 ir lncRNR kiekį, aktyvuotą transformuojant augimo faktorių-β, nei pacientams, neturintiems HCC, ir šios lncRNR yra stipriai susijusios su TNM stadija ir naviko tūriu.110 Conigliaro ir kt.Nustatyta, kad CD90+ egzosomos išreiškia aukštą lncRNAH19 kiekį, kuris žymiai padidino kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus (VEGF) išsiskyrimą ir VEGF-R1 receptorių gamybą, taip stimuliuodamas angiogenezę.93 CircRNR yra dar vienas egzosominių ncRNR tipas – išreikštas žemesniu, bet stabiliu lygiu visose rūšyse, cirRNR taip pat pasižymi ląstelių tipui, audinių tipui, vystymosi stadijai ir reguliavimo aktyvumui.111 cirRNR yra diagnostiniai ankstyvojo ir minimaliai invazinio vėžio biomarkeriai.112 Naujausi klinikiniai tyrimai parodė, kad atskirų miRNR specifiškumas prognozuojant HCC nėra idealus.Todėl kompleksinis aptikimas naudojant kelis tyrimus (pvz., miR-122 ir miR-48a kartu su AFP) gali pagerinti ankstyvo HCC identifikavimą ir HCC diferenciaciją nuo cirozės.100
Pacientai, sergantys CHB ir kepenų ciroze, yra dažniausia didelės rizikos grupė susirgti HCC.Didelės rizikos grupėms, pasiekus ilgalaikį virusologinį atsaką, turėtų būti sukurta ekonomiškai efektyvi stebėjimo strategija, pagrįsta HCC rizika, o ankstyva atranka yra raktas į geresnį HCC diagnozavimą ir gydymą turint didelį ekonomiškumo koeficientą2. ..Ankstyvieji vėžio atrankos metodai turi daug apribojimų: veiksmingi ankstyvosios atrankos metodai daugeliui vėžio rūšių nebuvo sukurti, o jų laikytis paprastai yra mažai.Lyginant su tradiciniais ankstyvosios atrankos metodais, skystos biopsijos technologija turi akivaizdžių pranašumų: paprastas mėginių ėmimas, panrac aptikimas, geras mėginio atkuriamumas ir veiksminga reakcija į naviko nevienalytiškumą.Atsižvelgiant į metodų, susijusių su skysta biopsija, ekonomiškumą, jų naudojimas HCC atrankoje nebuvo reguliariai išbandytas.Nepaisant tikslaus aptikimo molekuliniu lygiu pažangos, skysčių biopsija yra brangi norint aptikti HCC tiksliniams pacientams, o tai riboja platų jos naudojimą, palyginti su specifinėmis vaizdavimo procedūromis, tokiomis kaip ultragarsas ir magnetinio rezonanso tomografija.113 114 Tačiau ankstesnis tyrimas parodė, kad skystoji biopsija parodė didelę naudą, atsižvelgiant į kokybės pakoreguotus gyvenimo metus (QALY).115 Taip pat buvo įrodyta skystos biopsijos nauda ankstyvajai skrandžio ir nosiaryklės karcinomai.116 117 Dabartinė nuomonė yra tokia, kad skystoji biopsija gali papildyti serumo biomarkerius ir radiologinį patikrinimą nustatant ir diagnozuojant navikus.117 118
Remiantis dabartine literatūra, skysčių biopsijos technologija parodė žymiai didesnį jautrumą ir specifiškumą ankstyvoje didelės rizikos grupių pacientų dėl kepenų vėžio atrankoje.Nepriklausomai nuo skysčių biopsijos tipo, ji gali atskirti HCC nuo didelės rizikos asmenų, neturinčių HCC, o tai rodo, kad svarbu atlikti ankstyvą atranką, nes yra akivaizdūs skirtumai tarp didelės rizikos ir sveikų asmenų.ctDNR pusinės eliminacijos laikas yra trumpas ir gali būti naudojamas HCC aptikti, todėl bet kokie naviko kilmės cDNR pokyčiai gali suteikti realiu laiku konkrečių naviko progresavimo įrodymų, ypač mažų navikų atveju.Aukštas ctDNR lygis rodo vėžio vystymąsi ir plitimą ir yra ankstyvas progresavimo ir pasikartojimo rodiklis.Be to, remiantis ctDNR rezultatais, pacientai gali gauti individualų gydymą ir stebėti.119 Konkrečios metilinimo vietos gali būti geresnis žymeklis nei AFP ankstyvam HCC ir cirozės mazgelių identifikavimui.Rezekuojamais HCC atvejais didelis cDNR kiekis rodo mikrovaskulinę invaziją ir pooperacinį pasikartojimą bei metastazes.Kopijų skaičiaus pokyčiai yra susiję su pacientų, sergančių HCC, išgyvenimu.Galima daryti prielaidą, kad cDNR įvertinimas gali būti įtrauktas į bendrą HCC gydymą, o cDNR gali būti veiksmingas terapinio moduliavimo rodiklis.Žymekliai, pagrįsti specifinėmis genetinėmis mutacijomis ctDNR, buvo patvirtinti klinikinėse gairėse, siekiant prognozuoti veiksmingumą ir stebėti atsparumą vaistams.ctDNR tyrimas gali būti naudingiausia skystos biopsijos priemonė ankstyvam patikrinimui.CTC taip pat atlieka pagrindinį vaidmenį atliekant ankstyvą didelės rizikos HCC grupių atranką.Įvairūs su HCC susijusių CTC žymenys yra ypač svarbūs HCC atsiradimui, vystymuisi ir pasikartojimui.Kaip membranos pūslelės, egzosomos dalyvauja tarpląsteliniame ryšyje, ypač HCC ląstelėse.Cirkuliuojančios mikroRNR yra stabilios kraujyje, todėl gali būti naudingesnės ankstyvam HCC patikrinimui.Palaipsniui buvo atrasti egzosominiai baltymai ir RNR turtingos egzosomos, o jų nuspėjamasis veiksmingumas HCC buvo patvirtintas.Įdomu tai, kad skirtingos HCC etiologijos taip pat gali būti susijusios su skirtingomis mutacijomis, todėl galime pasirinkti skirtingus biomarkerius ankstyvam patikrinimui, remiantis skirtingomis HCC etiologijomis.120
Tačiau dabartiniai skysčių biopsijos metodai yra abejotini dėl stabilumo ir negali savarankiškai atlikti ankstyvo HCC patikrinimo ar stebėjimo, tačiau vis tiek gali papildyti individualų patikrinimą ir diagnozę.121 Kaip skystos biopsijos forma, ctDNR, CTC, cfRNR ir su egzosomomis susijusių AFP arba PIVKA-II aptikimas ir vaizdavimas yra daug žadantis pritaikymas ankstyvoje HCC diagnozėje ir prognozėje.Tačiau tikslus ctDNR išsiskyrimo į kraują mechanizmas dar turi būti išaiškintas.Pagrindinių ctDNR biologinių savybių atskleidimas gali palengvinti jos naudojimą kaip žymenį.Mažas ctDNR kiekis kraujyje ir griežti mėginių tvarkymo reikalavimai yra iššūkiai klinikiniam cDNR aptikimo HCC įgyvendinimui.Be to, genetinės mutacijos neturi specifinių požymių, leidžiančių tiksliai nustatyti kancerogenus.Kadangi normaliuose audiniuose taip pat yra daug genetinių ir somatinių variantų, skysčių biopsijos metu nustatytos genetinės mutacijos gali būti ribotos naudos atliekant ankstyvą HCC atranką.122 Tiksliai apibrėžtų naudingų genų taikinių ir biomarkerių, padedančių atskirti cDNR nuo ne naviko DNR, apribojimai yra svarbiausi cDNR naudojimo klausimai.jautrių ir specifinių žymenų naudingumo trūkumas CTC aptikimui.Buvo rastos tik gyvybingos ląstelės, turinčios metastazavimo potencialą, o optimalus CSC praturtintų žymenų derinys buvo neaiškus.CTC išskyrimas kultūrai ir jų mutacijų profilių įvertinimas taip pat yra sudėtinga užduotis.Dėl problemų, susijusių su egzosomų identifikavimu, išskyrimu ir gryninimu, specifinis molekulinis mechanizmas vis dar neaiškus, o ankstesni egzosomų ir HCC mechanizmo tyrimai nebuvo išsamūs ir tai, kaip miRNR, lncRNR ir baltymai yra rūšiuojami į egzosomas. , ir neaišku, ar egzosomų įsisavinimas yra specifinio tipo procesas.Egzosomų naudojimas HCC diagnostikai ir gydymui vis dar yra ikiklinikinėje stadijoje.Skystos biopsijos procedūrų, pvz., mėgintuvėlių, naudojamų kraujui paimti, kraujo tūriui, mėginių saugojimui ir aptikimui, izoliavimui ir sodrinimui, standartizavimo trūkumas gali trukdyti jas naudoti įprastinėje klinikinėje praktikoje dėl skirtingų medicinos centrų praktikos.Skystos biopsijos veiksmingumas ankstyvoje atrankoje, diagnozėje, veiksmingumo vertinime ir HCC prognozėje dar turi būti ištirtas, ypač didelės rizikos grupėms.Skystos biopsijos technologija turi didelį potencialą ir artimiausiu metu turėtų būti plačiai naudojama kepenų vėžio klinikinėje praktikoje.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL ir kt.Pasaulinė vėžio statistika 2020 m.: GLOBOCAN apskaičiavo sergamumą ir mirtingumą nuo 36 vėžio tipų 185 šalyse.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Nacionalinės sveikatos komisijos būstinė.Pirminio kepenų vėžio diagnostikos ir gydymo kriterijai (2022 m. leidimas) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z ir kt.Hepatoceliulinės karcinomos diagnostikos ir gydymo gairės (2019 m. leidimas).Kepenų vėžys.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K ir kt.Kepenų ląstelių karcinomos klinikinės praktikos gairės: Japonijos kepenų ligų draugija, 2017 m. (JSH-HCC 4-osios gairės), 2019 m. atnaujinimas.Kepenų ligų rezervuaras.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Skysta biopsija sergant lėtinėmis kepenų ligomis.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Skysta krūties vėžio biopsija: tikslinga apžvalga.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Kepenų ląstelių karcinomos stebėjimas: dabartinė geriausia praktika ir ateities kryptys.Gastroenterologija.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.Klinikinės gairės EASL-EORTC: kepenų ląstelių karcinomos gydymas.J Heparinas.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK ir kt.Kombinuota AFP ir HCCR-1, kaip naudingų serologinių žymenų mažos kepenų ląstelių karcinomos, analizė: perspektyvus kohortos tyrimas.Dis Markas.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233 / DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S ir kt.Diferencinė plazmos mikroRNR-125b ekspresija sergant hepatito B virusu susijusia kepenų liga ir hepatito B viruso sukeltos kepenų ląstelių karcinomos diagnostinis potencialas.Kepenų ligų rezervuaras.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. ir kt.Alfa-fetoproteino biologija ir reikšmė kepenų ląstelių karcinomai.Kepenų tarpt.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N ir kt.Klinikinės kepenų ląstelių karcinomos gydymo gairės Azijos ir Ramiojo vandenyno regione: 2017 m.Tarptautinė kepenų ligų organizacija.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei ir kt.Diagnostinė serumo PIVKA-II vertė atskirai arba kartu su AFP Kinijos pacientams, sergantiems kepenų ląstelių karcinoma.Dis Markas.2021; 2021: 8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. ir kt.Nesmulkialąstelinis plaučių vėžys, neplazminis humoralinio skysčio biopsija: arčiau naviko!ląstelė.2020;9(11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Skysta biopsija: dabartinė būklė ir ateities perspektyvos.Gydymas Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P ir kt.Skysčio pagrindo vėžio biopsija: multimodalinė diagnostikos priemonė klinikinėje onkologijoje.Adv Med Oncol.2018 m.;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nukleino rūgštys žmogaus plazmoje.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM ir kt.Pažangus cirkuliuojančio naviko DNR aptikimas fragmento dydžio analize.Mokslas verčia mediciną.2018;10:466.doi: 10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. ir kt.Cirkuliuojančio naviko DNR fragmento ilgis.PLOS genai.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Cirkuliuojanti naviko DNR: perspektyvus biologinis žymeklis skysto vėžio biopsijoje.tikslinis navikas.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ ir kt.Cirkuliuojančio naviko DNR aptikimas ankstyvose ir vėlyvose žmogaus piktybinių navikų stadijose.Mokslas verčia mediciną.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Skysta biopsija, skirta kietojo vėžio mutacinei prognozei analizei: patologo perspektyva.J Biotechnologija.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T ir kt.Ankstyvas naviko aptikimas atliekant cirkuliuojančios plazmos DNR atranką: ažiotažas ar viltis?Belgijos klinikinė teisė.2020 m.;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Hepatito viruso ir senėjimo poveikis DNR metilinimui žmogaus hepatokarcinogenezėje.Histopatologija.2010;25(5):647–654.doi: 10.14670 / HH-25.647